細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)
1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體.貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落.
(2) 染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)..
磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)
磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期,PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中(圖3).Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合.將Annexin-V進(jìn)行熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生...
線粒體膜勢(shì)能的檢測(cè)
線粒體在細(xì)胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡,而線粒體跨膜電位DYmt的下降,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過 程中最早發(fā)生的事件,它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)...
DNA片斷化檢測(cè)
細(xì)胞凋亡時(shí)主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段,或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNAladder).細(xì)胞經(jīng)處理后...
TUNEL法
細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光 素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè),這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法...
凋亡相關(guān)蛋白TFAR19蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位分析
TFAR19(PDCD5)是由本研究室在國(guó)際上首先報(bào)導(dǎo)的一個(gè)擁有自己知識(shí)產(chǎn)權(quán)的人類新基因,前期的功能研究表明,它是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的增強(qiáng)劑.利用熒光 素(FITC)標(biāo)記的TFAR19單克隆抗體為探針,對(duì)細(xì)胞凋亡過程中TFAR19蛋白的表達(dá)水平及定位研究發(fā)現(xiàn),凋亡早期TFAR19表達(dá)水平增高并出 現(xiàn)快速核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象
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